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產(chǎn)品名稱:原代口腔癌條件重編程培養(yǎng)基(Human Oral Cancer Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說明:原代口腔癌條件重編程培養(yǎng)基(Human Oral Cancer Conditional Reprogramming Medium)是一種為促進口腔癌原代細胞體外生長而設計的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)等。培養(yǎng)基基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時,pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個理想平衡的營養(yǎng)環(huán)境,選擇性地促進體外人口腔癌原代細胞的生長。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明
?使用前準備
(1) y射線照射過的NIH-3T3細胞(40Gy輻照)。
(2)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細胞培養(yǎng)基平衡至室溫。
?口腔癌原代細胞培養(yǎng)
(1)獲取的人源口腔癌原代細胞,按照表1中細胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中,加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞(添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1和表2所示)。
(2)原代細胞初次接種后2-3 天勿動(利于細胞貼壁),培養(yǎng)過程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細胞未長滿時可進行半換液。
(3)鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時,適量補充y射線輻照后的3T3細胞(一般補加初始數(shù)目的一半)。
?口腔癌原代細胞傳代
(1)鏡下觀察細胞形成克隆,且匯合度達到85~95%時即可傳代。
(2)培養(yǎng)箱中取出細胞,棄舊培養(yǎng)液,0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡,再加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,2~5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面,顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3)細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養(yǎng)基終止消化,并將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中,1500 rpm, 3 min。
(4)棄上清,以1~5mL相對應的原代細胞培養(yǎng)基重懸細胞,活細胞計數(shù),將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板,加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞(不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1、表2所示),補加腸癌培養(yǎng)基至所需體積,十字交叉混勻,培養(yǎng)容器75%表面消毒后置培養(yǎng)箱,37℃、5%CO2條件培養(yǎng)。其他步驟同上。
注意事項:
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.使用產(chǎn)品時應注意無菌操作,避免污染。
3.本產(chǎn)品中含有原代細胞專用抗生素,如無特別需要不用額外再添加雙抗,可直接使用。
4.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。5.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,超出保質(zhì)期,必須放棄使用。
6.本產(chǎn)品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。